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碱性蛋白酶测试盒 可见分光光度法

碱性蛋白酶测试盒 可见分光光度法 AKP 是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类,属于丝氨酸蛋白酶。此外,该酶还能够水解酯键、酰胺键,具有转酯及转肽的功能。该酶是主要工业用酶之一,广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。

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碱性蛋白酶测试盒  可见分光光度法

注意:正式测定之前选择 2-3  个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
AKP 是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类,属于丝氨酸蛋白酶。此外,该酶还能
够水解酯键、酰胺键,具有转酯及转肽的功能。该酶是主要工业用酶之一,广泛应用于制药、
丝绸、食品、制革等行业。


测定原理:
在碱性条件下,AKP 水解酪蛋白生成酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝;
钨蓝在 680nm 有特征吸收峰,测定 680nm 吸光度增加速率,来计算 AKP 活性。


自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP 管、1mL 玻璃比色皿和
蒸馏水。


试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 10 mL 蒸馏水溶解。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 10 mL 试剂一,沸水浴中溶解。
试剂四:粉剂×1 瓶, 4℃保存。临用前加 50 mL 蒸馏水溶解。
试剂五:液体×1 瓶,4℃保存。
标准品:液体×1 支,0.25 μ mol/mL 标准酪氨酸溶液,4℃保存。


粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,
加入 1mL 试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即粗酶液。
2. 血清或培养液:直接测定。
3. 细菌、真菌:按照细胞数量(10 4 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建
议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7
秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。


测定操作:
1. 分光光度计预热 30min,调节波长到 680 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二、试剂三和试剂四置于 40℃水浴保温 30min。
3.  对照管:取一支 EP 管,加入 100μL 粗酶液(血清或培养液),200μL  试剂二,混匀后置于 40℃水浴保温 10min;加入 200μL  试剂三,混匀后 8000g ,4℃离心 10min;取 200μL 上清液,加入新的 EP 管,再加入 1000μL 试剂四,200μL 试剂五,混匀后置于 40℃水浴保温20min,于 680nm 测定光吸收,记为 A 对照管。
4.  测定管:取一支 EP 管,加入 100μL 粗酶液(血清或培养液),200μL  试剂三,混匀后置于 40℃水浴保温 10min;加入 200μL  试剂二,混匀后 8000g ,4℃离心 10min;取 200μL 上清液,加入新的 EP 管,再加入 1000μL 试剂四,200μL 试剂五,混匀后置于 40℃水浴保温20min,于 680nm 测定光吸收,记为 A 测定管。(注意与对照管不同,先加试剂三,后加试剂二)
(注意与对照管不同,先加试剂三,后加试剂二)
5.  空白管:取一支 EP 管,加入 200μL 蒸馏水,1000μL 试剂四 200μL 试剂五,混匀后置于40℃水浴保温 20min,于 680nm 测定光吸收,记为 A 空白管。
6. 标准管:取 EP 管,加入 200μL 标准品,1000μL 试剂四,200μL 试剂五,混匀后置于 40℃

水浴保温 20min,于 680nm 测定光吸收,记为 A 标准管。
注意:空白管和标准管只需要测定一次。


计算公式:
1. 按照样本蛋白浓度计算
AKP 活性单位定义:40℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生 1nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
AKP 活性(nmol/min/mg prot)= C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白
管)×稀释倍数÷(Cpr×V1)÷T= 625×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷CprC 标准品:0.25 μ mol/mL 标准酪氨酸溶液;稀释倍数:(100+200+200)÷200=2.5;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),注意该粗酶液不能直接用于蛋白质含量测定,需要另外测定;建议称取同样质量的样品,加入注意该粗酶液不能直接用于蛋白质含量测定,需要另外测定;
建议称取同样质量的样品,加入 1mL 蒸馏水匀浆提取离心后,用本公司蛋白质含量测定试
剂盒测定
蒸馏水匀浆提取离心后,用本公司蛋白质含量测定试
剂盒测定;V1:加入反应体系中粗酶液(血清或培养液)体积,100μL=0.1 mL;T:催化反
应时间,10min。


2.按照样本质量计算.
AKP 活性单位定义:40℃每克样品每分钟催化水解产生 1 nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
AKP 活性(nmol/min/g)= C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×
稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T= 625×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准品:0.25 μ mol/mL 标准酪氨酸溶液;稀释倍数:(100+200+200)÷200=2.5;W:样
品质量,g;V1:加入反应体系中粗酶液体积,100μL=0.1 mL;V2:粗酶液总体积,1mL;
T:催化反应时间,10min。


3. 按照液体体积计算
AKP 活性单位定义:40℃每毫升样品每分钟催化水解产生 1nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
AKP 活性(nmol/min /mL)= C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
×稀释倍数÷V1÷T= 625×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准品:0.25 μ mol/mL 标准酪氨酸溶液;稀释倍数:(100+200+200)÷200=2.5;V1:加
入反应体系中血清或培养液体积,100μL=0.1 mL; T:催化反应时间,10min。


4. 按照细胞数量计算
AKP 活性单位定义:40℃每 10 4 个细胞每分钟催化水解产生 1nmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
AKP 活性(nmol/min/10 4 cell)= C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)× 稀释倍数÷(细胞数量×V1÷V2)÷T= 625×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A空白管)÷细胞数量
C 标准品:0.25 μ mol/mL 标准酪氨酸溶液;稀释倍数:(100+200+200)÷200=2.5; V1:加入反应体系中粗酶液体积,100μL=0.1 mL;V2:粗酶液总体积,1mL;T:催化反应时间,
10min。


注意事项:
临用前配制的试剂配置好后 3 天内使用完毕。

 

碱性蛋白酶测试盒  可见分光光度法订购说明:

1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日zui新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后,将底单等连同收货人的地址、姓名、电话等以传真、EMail、短信、电话等形式通知我们。


碱性蛋白酶测试盒  可见分光光度法运输说明:

极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝专用的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送至客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝专用冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝专用的箱子(保温效果zui少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送至客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。

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