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温度敏感型UNG酶(TS-UNG)

温度敏感型UNG酶(TS-UNG):
TS-UNG酶基因来源于低温微生物,经大肠杆菌重组表达获得的新型温度敏感型UNG酶。该酶与常规UNG酶相同,能够催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶,对RNA无活性,主要应用于PCR扩增产物的防污染。TS-UNG酶与常规UNG酶相比,对温度敏感、易于灭活,从而避免了常规UNG酶灭活后残留活性对荧光PCR灵敏度及扩增产物的降解作用。

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温度敏感型UNG酶(TS-UNG)

Temperature Sensitive UNG

货号

TS-UNG

  E010050

  50U

E010100

100U

E010500

500U

E011000

1000U

温度敏感型UNG酶(TS-UNG): 

TS-UNG酶基因来源于低温微生物,经大肠杆菌重组表达获得的新型温度敏感型UNG酶。该酶与常规UNG酶相同,能够催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶,对RNA无活性,主要应用于PCR扩增产物的防污染。TS-UNG酶与常规UNG酶相比,对温度敏感、易于灭活,从而避免了常规UNG酶灭活后残留活性对荧光PCR灵敏度及扩增产物的降解作用。

TS-UNG酶可以在25℃~50℃范围内使用,在37℃左右具有zui大反应活性。建议在37℃,10min消化含dUTP模板,在50℃,10min或95℃,2min进行灭活。利用TS-UNG酶低温消化、低温灭活的特性,TS-UNG酶可以用于RT-PCR防止扩增污染。

活性定义:
37℃条件下,1小时降解1μg含dU碱基的单链DNA的酶量为1单位。

规格:1U/μl

储存缓冲液:
20 mM Tris-HCl,pH 7.5(25℃),100 mM NaCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,0.1% Triton X-100,50% glycerol. 

保存条件:
保存于-20℃。并避免保存时反复冻融。

反应条件:

1、反应体系:

 

Component

Volume per

Reactionμl

Concentration in Master Mix

Template

*

< 1μg/reaction

Primer 1

1~5

0.2~1.0μM

Primer 2

1~5

0.2~1.0μM

d NTPs

(replace dTTP for 200μM~600μM dUTP) 

1

200μMdATPdGTPdCTP

10×PCR Buffer

5

25mM MgCl2

2~8

1.0~4.0mM

 Taq5U/μl

0.25

1.25U

TS-UNG(1U/μl

0.2~0.5

0.2~0.5U

H2O

*

——

Total volume

50μl

 

2、Incubate the product for 10min at 37℃;

3、Inactivate TS-UNG by heating to 50℃ for 10min,or 95℃ for 2min;

质量控制:

1、SDS-PAGE电泳纯度大于98%;

2、无核酸外切酶和核酸内切酶活性、RNase酶活性;

注意事项:
1、由于不同目的基因碱基组成不同,因此对TS-UNG酶的敏感度也不同,建议根据试验结果,在0.2~0.5U之间选择TS-UNG适合用量。

2、避免多次冻融,切勿暴露在温度波动较大之处。温度波动对产品的稳定性有极大影响。3、TS-UNG酶可以在PCR反应前清除不慎污染的U-DNA分子。为有效防止污染,一个实验室必须在所有的PCR反应中均使用dUTP作为dNTPs组分之一进行扩增,使所有扩增产物都成为U-DNA。 

温度敏感型UNG酶(TS-UNG)

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