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WST-Cell Counting Kit(CCK-8 试剂盒)说明书

点击次数:1927 发布时间:2013/4/11
提 供 商: 北京索莱宝科技有限公司 资料大小:
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 Cell Counting Kit(CCK-8 试剂盒

产品简介:

Cell Counting Kit 简称CCK 试剂盒,为MTT 法的替代方法,是一种基于WST(水溶性四唑盐,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

货号

名称

规格

价格

CA1210-100

Cell Counting Kit

100

215

CA1210-500

Cell Counting Kit

500

690

CA1210-1000

Cell Counting Kit

1000

1080

CA1210-5000

Cell Counting Kit

3000

2160

CCK 用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验

  操作说明:

  一、制作标准曲线测定细胞具体数量时

  1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

  2、按比例例如:1/2 比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5 个细胞浓度梯度,

  每组3-6 个复孔。

  3、接种后培养2-4 小时使细胞贴壁,然后加CCK 试剂培养一定时间后测定OD 值,制作出一条以细胞数

  量为横坐标(X OD 值为纵坐标(Y 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数

  量试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK 后的培养时间。

  二、细胞活性检测

  1、在96 孔板中接种细胞悬液(100μL/。将培养板放在培养箱中预培养37,5% CO2 的条件下

  2、向每孔加入10 μCCK 溶液注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数

  3、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。

  4、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。

  5、如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M HCL 溶液或者1% w/v SDS

  溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化。

  三、细胞增值-毒性检测

  1、在96 孔板中配置100μ的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24 小时37℃,5% CO2 的条件下

  2、向培养板加入10μ不同浓度的待测物质。

  3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间例如:61224 48 小时

  4、想每孔加入10μL CCK 溶液注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数

  5、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。

  6、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。

  7、如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M HCL 溶液或者1% w/v SDS

  溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化。

  注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK 之前更换新鲜培养基除去培养基,并用培养

  基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基,去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培

  养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

  备注:

  ①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK 试剂后的培养时间。

  ②有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔减的差异。加入CCK 试剂时,建议斜贴着培

  养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD 值读数。

  ③白细胞可能需要培养较长时间。

  ④当使用标准96 孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 /孔 (100 μ培养基。检测白细胞时的灵

  敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 /孔 (100 μ培养基。如果要使用24 孔板或孔板实验,

  请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK 溶液。

  ⑤如果没有450nm 的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片,但是450nm 滤光片的检测灵

  敏度最高。

  ⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影

  响。

  活力计算:

  细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0 加药)-A(空白)] ×100

  A(加药:具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度

  A(空白:具有培养基和CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度

  A(0 加药:具有细胞、CCK 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

  *细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

  保存条件:

  4℃避光保存,有效期一年。

 

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