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Cytochromes C 细胞色素C(牛心)溶液的制备
点击次数:417 发布时间:2018-01-25
   Cytochromes C细胞色素C(牛心)是细胞色素一种。它在线粒体呼吸链的一个重要组成部分。每分子细胞色素C含有一个血红素和一条多肽链。氨基酸残基的数目在103-113之间;不同来源细胞色素C的的氨基酸残基的顺序及含量都有一定的差异。细胞色素C中赖氨酸含量较高。Cytochromes C细胞色素C(牛心)是一种稳定的可溶性蛋白,它易溶于水及酸性溶液,细胞色素C对酸碱也较稳定,常用酸性水提取,另外细胞色素C对热比较稳定,不易变性。分为氧化型和还原型两种,氧化型水溶液呈深红色,还原型水溶液呈桃红色。一般都将细胞色素C制成还原型的,因为比较稳定并易于保存。细胞色素C在心肌组织和酵母中含量丰富。
  以牛心为材料,经过酸溶液提取,人造沸石吸附,硫酸铵溶液洗脱得到红色透亮Cytochromes C细胞色素C(牛心)溶液。
  试剂与器材:搅拌机、人造沸石、纱布、烧杯等。
  操作方法:
  材料处理—提取—中和—吸附—洗脱;
  1.材料处理取新鲜或冰冻牛心,除去脂肪和韧带,用水洗去积血,将猪心切条,放入搅拌机绞碎。
  2.提取压滤称取绞碎牛心肌肉,加1.5倍蒸馏水,搅拌均匀,用2mol/L的H2S04调pH至4.0(此时溶液呈暗紫色),在室温下搅拌提取2小时,在提取过程,使抽提液的pH值保持在4.0左右。用八层普通纱布压挤过滤,收集滤液,用1mol/L氨水(NH40H)调pH至6.2离心,分离取清液。滤渣加入等量蒸馏水,再按上述条件提取一次,两次提取液合并。
  3.中和将上述提取液用2mol/L NH40H调至pH 7.2,在水浴中静置沉淀蛋白质,30~40分钟后过滤,所得滤液准备通过人造沸石进行吸附。
  4.吸附与洗脱按每升滤液加入10g沸石,在不断搅拌情况下,使之吸附40min,静置,弃去上层清液。用蒸馏水洗涤吸附有细胞色素C的沸石3次,氯化钠(0.2%)洗涤4次,再用蒸馏水洗至洗液澄清。再用硫酸铵(25%)溶液洗脱,收集洗脱液,得到红色透亮Cytochromes C细胞色素C(牛心)溶液。

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